1. 小鼠IgG产品的用途
(1)免疫反应中的封闭剂,封闭固相材料表面,降低抗体和抗原的非特异性结合。
(2)免疫反应中的阻断剂,阻断待检测样品中内源性异嗜性抗体对抗原抗体的非特异性结合,提高反应的灵敏度和特异性。
(3)在一些生化分析测试中作为IgG对照品。
(4)作为蛋白质的稳定剂。
(5)作为参考抗原,用于药物试验中观察免疫效果。
2. 小鼠IgG的应用场景和原理
作为免疫反应中的封闭剂和阻断剂,小鼠IgG适用于几乎所有的免疫检测分析,包括酶联免疫吸附、侧向流免疫层析、化学发光免疫分析、蛋白免疫印迹、胶体金免疫层析等,是IVD领域的通用原料,被广泛应用于疾病诊断试剂盒、检测试纸、医学检测、实验室分析等场景。
小鼠IgG具体应用场景主要包括以下几个方面:
(1)免疫诊断试剂
鼠源的IgG被用作免疫分析试剂。通过使用特异性的抗体与鼠源IgG结合,可以检测目标蛋白质在样本中的存在并确定其数量。
应用场景:ELISA、Western Blotting、免疫组化等抗原检测
原理:作为标记过的抗体,与检测抗体(直接检测)或一组匹配的未标记检测抗体和标记二抗(间接检测)检测病人样本中的的抗体。
(2)阻断剂、封闭剂
在某些免疫反应实验中,背景信号会干扰所需的结果准确性,研究人员使用小鼠IgG来消除这种背景信号,小鼠IgG会结合一些非特异性的受体和其他成分,从而降低背景信号,阻断非特异性成分对检测的干扰;此外,小鼠IgG可用于饱和固相材料表面上未被抗体包被的结合位点,从而防止被检测物质的非特异性结合,起到封闭固相表面的作用。
应用场景:ELISA、胶体金、免疫荧光、疾病诊断试剂盒;
原理:在免疫诊断检测中,经常存在非特异性干扰影响检测结果的准确性。这种非特异性结合可发生于
a. 固相材料和非目标蛋白质的结合或
b. 待测样品中存在的内源性检测抗体和检测试剂中抗体的结合。
为防止非特异性结合,在固相材料包被之后使用封闭剂封闭固相材料上剩余未结合的位点,在准备检测样本的过程中使用阻断剂阻断内源性干扰抗体与检测试剂抗体的结合,从而提高检测的灵敏度和特异性,避免假阳性或假阴性结果。
样品中的未结合的杂质﹐如蛋白质﹐干扰分子等和测定标记物结合到固相材料表面并与特异性抗原-抗体反应信号竞争从而引起的背景噪声和降低检测信号。
封闭缓冲液可包被固相材料上的开放位点从而防止未结合的杂质与开放位点的非特异性结合。小鼠IgG作为一种理想的封闭剂,一方面能够有效地封闭固相材料表面疏水性和亲水性位点。另一方面可以作为—种稳定剂用以防止蛋白在与固相材料的表面反应时发生变性。
理想封闭剂具有以下特征:
a. 有效地阻断测定反应物非特异性结合到固体材料表面;
b. 不影响已包被到固体材料表面的试剂有效成分,可以起到试剂有效成分在固相表面稳定剂(防止变性)的作用;
c. 不与其它试剂有效成分发生交叉反应;
d. 不具有酶活性并由此可能与试剂中的底物反应而使信号加强或降解试剂中的反应物;
e. 每个批号批间差小。
在免疫检测中,患者样本中通常存在多种内源性干扰物质,主要是异嗜性抗体(HA)、人抗鼠抗体(HAMA)和类风湿因子(RF),它们通过与检测抗体非特异性结合或发生弱交叉反应而降低检测的灵敏度和特异性, 导致假阳性或假阴性结果。
双抗夹心抗原检测、竞争法和lgM捕获检测都易受内源性干扰的影响,因此,想要提高免疫诊断检测的准确性和特异性,使用专门的免疫阻断剂来降低这些非特异性干扰引起的错误结果是必不可少的。
(3)流式细胞分选:
鼠源IgG通常用于流式细胞仪中用于区分不同的细胞类型和表面标志物。其可以:
a 标记靶细胞:在流式细胞术实验中,研究人员通常会选择一种或多种与鼠源IgG结合并高度特异性的荧光素或染料,例如FITC、PE、APC等,将其与鼠源IgG结合用于标记靶细胞。
b. 区分靶细胞(免疫诊断):标记好的鼠源IgG荧光素或染料结合到靶细胞表面标志物上后,流式细胞仪在扫描细胞时,可以根据相应荧光素或染料的激发和发射波长区分不同的靶细胞和它们的表面标志物。
c. 降低非特异性结合(阻断剂):鼠源IgG会通过其Fc受体与流式细胞试剂盒中的其他成分和细胞膜上的Fcγ受体结合,从而降低非特异性结合,使正式实验结果更加可靠。
(4)对照鼠源IgG:
用作免疫沉淀、免疫共沉淀、染色质免疫沉淀、免疫组化、免疫荧光、免疫印迹、等抗体相关实验时小鼠来源特定抗体的对照IgG。